急性呼吸道感染是兒童常見的呼吸道疾病，通常由病毒引起。呼吸道合胞病毒（RSV）和呼吸道腺病毒（ADV）是引起兒童急性呼吸道感染的兩種常見病原體。輕度者可引起常見的感冒癥狀，如咳嗽和流鼻涕，而嚴(yán)重者可出現(xiàn)嚴(yán)重的并發(fā)癥，如肺炎和中耳炎。根據(jù)世界衛(wèi)生組織的建議，病原體的檢測需要具備快速、準(zhǔn)確、敏感、特異性的特點(diǎn)，不應(yīng)依賴專門的技術(shù)人員或大型儀器。因此，開發(fā)一種能夠滿足上述檢測要求的RSV和ADV的檢測方法尤為重要。

深圳兒童醫(yī)院兒科研究所的馬東禮主任課題組在《Scientific Reports》期刊上發(fā)表文章《A multiplex recombinase polymerase amplification assay combined with CRISPR/ Cas12a for the detection of respiratory syncytial virus and respiratory adenovirus》，影響因子4.6。

研究概述

將多酶恒溫快速核酸擴(kuò)增技術(shù)MIRA與CRISPR/Cas檢測系統(tǒng)相結(jié)合。通過設(shè)計MIRA引物和CRISPR rna（crRNAs），多序列比較，優(yōu)化反應(yīng)條件，并使用熒光數(shù)值檢測裝置，驗(yàn)證靈敏度和特異性。

并且以qPCR結(jié)果作為比較對照，研究了160例臨床咽拭子樣本的檢測結(jié)果的一致性。

（MIRA-CRISPR/Cas12a檢測法檢測步驟示意圖）

實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1. MIRA-CRISPR/Cas12a檢測方法靈敏度和特異性

在MIRA方法檢測中，使用RSV-F1/R1引物對從RSV、ADV、PIV、RhV、MP、CP、FluB、hMPV、FluA或RSV/ADV合并感染患者的咽拭子樣本中擴(kuò)增核酸。除RSV和ADV有擴(kuò)增條帶，其他結(jié)果均為陰性，說明所選MIRA引物與檢測的其他8種病原體未發(fā)生交叉反應(yīng)，且保守性良好。

隨后，使用無菌水對RSV和ADV重組質(zhì)粒進(jìn)行10倍梯度稀釋，對RSV和ADV的檢測限均為106copies/mL。

（1-10：分別為RSV、RSV/ADV合并感染患者咽拭子樣本以及其他呼吸道病原體樣本）

（1-6：10⁷至10²稀釋質(zhì)粒DNA；7：陰性對照）

2.與qPCR做對比

與qPCR方法相比，RSV和ADV的檢出限均為10³copies/mL。

（qPCR檢測RSV和ADV的靈敏度）

       MIRA-CRISPR方法更適合基層實(shí)驗(yàn)室，檢測時間短，操作簡單，無需大型qPCR儀器即可完成實(shí)驗(yàn)操作。

3.臨床樣本對比

從急性呼吸道感染的兒童中采集咽拭子樣本160例。同時使用MIRA-CRISPR方法、qPCR方法進(jìn)行檢測，并將結(jié)果與臨床試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行比較。

與qPCR方法相比，MIRA-CRISPR方法對RSV和ADV的敏感性分別為98.1%和91.4%，檢測特異性均為100%。Kappa值大于0.95，表明其一致性程度較高。

MIRA-CRISPR方法對RSV和ADV的檢測具備快速、靈敏、特異性強(qiáng)的優(yōu)勢。它能及時準(zhǔn)確地檢測到病毒感染，更加適合于醫(yī)療資源匱乏的地區(qū)使用。

（上述數(shù)據(jù)等信息均來源于原文，鏈接：http://ajqw.com.cn/vip_doc/28304219.html）